２０１２年第２９卷第１期Ｖ０１．２９，Ｎｏ．１，２０１２中Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ医ｏｎ药信息・５３・１’ｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅ葡萄籽中多酚类物质提取工艺的研究周曼，曹唯仪，王玉蓉（北京中医药大学中药学院，北京１００１０２）摘要：目的：优选葡萄籽ｑ－多酚类物质的提取工艺。方法：以儿茶素为检测指标，采用Ｌ。（３４）正交试验，筛选溶剂浓度、提取次数和提取时间工艺参数。结果：最佳提取工艺为：１０ＢＶ５０％乙醇提取３次，提取时间为２ｈ、１ｈ、１ｈ。结论：该工艺可用于葡萄籽多酚类有效部分的提取。关键词：葡萄籽；多酚类；儿茶素；提取工艺中图分类号：１ｔ２８文献标识码：Ａ文章编号：１００２—２４０６（２０１２）０１—００５３—０２ＴｈｅＥｘｔｒａｃｔｉｏｎＰｒｏｃｅｓｓｏｆＰｏｌｙｐｈｅｎｏｌｓｆｒｏｍＧｒａｐｅＳｅｅｄＺＨＯＵＭａｎ，ＣＡＯＷｅｉ—ｙｉ，ＷＡＮＧＹｕ—ｒｏｎｇＣｈｉｎｅｓｅ（Ｂｅ彬ｎｇＡｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏｔｈｅｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｍａｒｋｅｒｓ，ｓａｃｈＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＭｅｄｉｃｉｎｅ，Ｂｅ彬ｎｇ１００１０２，Ｃｈｉｎａ）ａｓａｎｏｐｔｉｍｉｚｅｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｐｒｏｃｅｓｓｏｆｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌｓｆｒｏｍｇｒａｐｅｓｅｅｄ．Ｍｅｔｈｏｄ：Ｔａｋｅｃａｔｅｃｈｉｎａｓａｌｃｏｈｏｌｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ，ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｔｉｍｅｓａｎｄｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｔｉｍｅ，ａｎｄｗａｓａｓＬ９（３４）ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌｄｅｓｉｇｎｗａｓｅｍｐｌｏｙｅｄ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：Ｔｈｅｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｃｏｎｄｉｔｉｏｎｎｏｌｂｙｔｒｉｐｌｅｆｏｌｌｏｗｓ：ｗｉｔｈ１０ｔｉｍｅｓｏｆ５０％ｅｔｈａ—ｆｏｒ４．０ｈ（ｔｈｅｆｉｒｓｔｔｉｍｅｆｏｒ２．０ｈ，ｔｈｅｌａｓｔｔｗｏｔｉｍｅｓｆｏｒ１．Ｏｈｅａｃｈｔｉｍｅ）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｔｈｅｏｐｔｉ．ｃａｎｍｉｚｅｄｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙｉｓｓｔａｂｌｅａｎｄｆｅａｓｉｂｌｅ，ａｎｄｉｔｂｅｕｓｅｄｆｏｒｔｈｅｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｏｆｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌｓｆｒｏｍｇｒａｐｅｓｅｅｄ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ｇｒａｐｅｓｅｅｄ；Ｐｒｏｃｙａｎｉｄｉｎｓ；Ｃａｔｅｃｈｉｎ；Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｐｒｏｃｅｓｓ葡萄籽主要含有多酚类物质（ＧＰＳ），包括儿茶素类和原花青素类。其中儿茶素类包括儿茶素、表儿茶素及其没食子酸酯，是葡萄籽中主要的单聚体，也是原ＩＯＳ型电子分析天平（北京市赛多利斯仪器系列有限公司）；Ｇ１６型医用高速离心机（安新白洋离心厂）。儿茶素对照品（中国食品药品检定研究院，批号１１０８７７—２０１１０２）；葡萄籽（购自河北安国药材市场，经本校陈玉婷教授鉴定为正品）；香草醛、甲醇、浓盐酸（分析纯）。２方法与结果２．１含量测定方法的建立２．１．１花青素寡聚体和多聚体的构成单位，在植物体内经生物化学反应而形成复杂的聚合物¨Ｊ，是一种强抗氧化剂，其抗氧化功效是维生素Ｃ的２０倍、维生素Ｅ的５０倍；具有抗氧化及清除自由基、抗辐射、抗肿瘤、抗衰老、治疗心血管疾病、提高免疫功能、预防神经退行性改变等作用旧。４Ｊ。本文采用正交试验方法，以儿茶素为指标，筛选葡萄籽中多酚类有效部分的提取工艺，考对照品储备液的制备取１０５。Ｃ干燥至恒重的儿茶素对照品，精密称定２０．１８ｍｇ，置５０ｍＬ量瓶中，加蒸馏水溶解并定容至刻度，即得。２．１．２１．０２９察葡萄籽的最佳提取工艺参数。１仪器与试药供试品溶液的制备称取葡萄籽粗粉ＲＥ５２ＣＳ型旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）；Ｂ一２２０型恒温水浴锅（上海亚荣生化仪器厂）；紫外可见分光光度计（上海先科分光仪器有限公司）；ＢＳＩ．作者简介：周曼（１９８７一），女，北京中医药大学２０１０级中药制药学专业硕士研究生，主要研究方向：中药新剂型与新技术。通讯作者：王玉蓉（１９５１一），女，教授，主要研究方向：中药新剂型与新技术。收稿日期：２０１１—０７—０５修回日期：２０１１—０８—０４４９，置１００ｍＬ圆底烧瓶中，加６０％乙醇溶液５０ｍＬ，水浴回流提取２次，每次３０ｍｉｎ，滤过，合并滤液，减压浓缩回收乙醇，水相转移至１００ｍＬ量瓶中，蒸馏水稀释至刻度，定容∞１。取上述溶液４ｍＬ，离心３０ｍｉｎ（１６０００ｒ／ｍｉｎ），取上清液，备用。２．１．３吸收波长的选择精密吸取对照品溶液和供试品溶液各０．５ｍＬ，置ｌＯｍＬ比色管中（避光），加入３．ＯｍＬ４％香草醛甲醇溶液和１．５ｍＬ浓盐酸，混匀，室温放置显色１５ｍｉｎ∞。。以纯水为空白，在２００～８００ｎｍ万方数据中Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ医ｏｎ药信息２０１２年第２９卷第１期Ｖ０１．２９，Ｎｏ．１，２０１２ＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅ波长范围内进行扫描，结果显示，对照品溶液和供试品５００ｎｍ，见图１。溶液均在５００ｎｍ处有最大吸收峰，确定吸收波长为ＡＢＡ．对照品溶液图１Ｂ一供试品溶液对照品溶液和供试品溶液吸收波长扫描图２．１．４儿茶素标准曲线的制备分别精密移取对照品储备液１．０ｍＬ、３．０ｍＬ、４．０ｍＬ、５．０ｍＬ、７．０ｍＬ、８．ＯｍＬ，置ｌＯｍＬ量瓶中，加蒸馏水定容至刻度。分别移取上述不同浓度对照品溶液各０．５ｍＬ，置１０ｍＬ比色管中（避光），加入３．ＯｍＬ４％香草醛甲醇溶液和１．５ｍＬ浓盐酸，混匀，室温放置显色１５ｍｉｎ。以纯水为空白，照紫外一可见分光光度法，在５００ｎｍ处测定吸２．２．２溶剂倍量对多酚提取效果的影响考察６ＢＶ、８ＢＶ、１０ＢＶ、１２ＢＶ及１４ＢＶ溶剂倍量对多酚提取效果的影响，其余操作同２．２．１。结果显示，ＩＯＢＶ乙醇较为适宜，见图３。光度（Ａ）。以儿茶素浓度（Ｘ）为横坐标，吸光度（Ｙ）为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程Ｙ＝１．７７３Ｘ＋０．０００１，ｒ＝０．９９９８。结果显示，儿茶素对照品在图３０．０３８１—０．３０４８ｍｇ／ｍＬ范围内线性关系良好。准确称取溶剂倍量对多酚提取效果的影响２．２不同提取条件对多酚提取效果的影响２．２．１２．２．３提取时间对多酚提取效果的影响考察提取乙醇浓度对多酚提取效果的影响时间３０、６０、９０、１２０、１５０ｒａｉｎ对多酚提取效果的影响，结果显示，１．５ｈ多酚得率可达９０％以上，见图４。２・５０葡萄籽粗粉５份，分别置于１００ｍＬ圆底烧瓶中，依次加入８ＢＶ２０％、４０％、６０％、８０％、９５％的乙醇溶液，回流提取２次，每次３０ｍｉｎ，滤过，合并滤液，滤液减压浓缩回收乙醇，水相用蒸馏水定容至１００ｍＬ，摇匀，备用。精密量取２．０ｍＬ样品溶液，置１０ｍＬ量瓶中，加蒸馏水稀释至刻度，摇匀，得各乙醇浓度项下供试品溶液。取供试品溶液４ｍＬ，离心３０ｍｉｎ（１６０００ｒ／ｍｉｎ），吸取上清液０．５ｍＬ，置１０ｍＬ比色管中（避光），照儿茶素标准曲线制备项下的方法，测定样品溶液的吸光度，计算多酚喜２００鬟１．５０羹ｌ０００鼍０．，５０００图４提取时间对多酚提取效果的影响２．３正交试验优选Ｌ。（３４）正交试验方法考察乙醇得率。结果显示，４０％、６０％乙醇多酚得率较高，见图２。浓度（Ａ）、提取次数（Ｂ）和提取时间（Ｃ），１０ＢＶ提取溶剂，以多酚含量为指标，并计算提取物干膏得率。结果见表１～３。表ｉＬ９（３４）因素水平表５０１．０６０１．５图２乙醇浓度对多酚提取效果的影响７０２．０万方数据２０１２年第２９卷第１期Ｖ０１．２９，Ｎｏ．１，２０１２中Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ医ｏｎ药信息・５５・ＴｒａｄｉｔｉｏｎＭＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅ表２正交试验与结果试验号ＡＢＣＤ得率（％）出膏率（％）结果显示，提取时间延长，含量无显著性差异。综合考虑工业成本、提取效率，用１０倍量５０％乙醇，提取３次，第１次２ｈ，第２次ｌｈ，第３次１ｈ，药材中多酚含量为２．３ｌ％，出膏率为７．１ｌ％。３讨论葡萄籽中的含量测定方法主要有香草醛一盐酸比色法和铁盐催化比色法，但铁盐催化比色法对样品中含水量要求苛刻，显色温度较高，时间较长。因此，选择操作简便的香草醛一盐酸比色法。通过单因素考察，分别比较了乙醇浓度、溶剂倍量、提取时间对提取多酚类成分工艺的影响，为正交试验提供合理可靠的考察因素和水平。通过正交试验设计优选出Ａ，Ｂ，Ｃ，，即１０倍量５０％乙醇，提取３次，每０．０３ｌＯ．７１８０．０３７Ｏ．０１６０．０１６０．３５９０．０１９０．００８２．００８４５．８１９２．３７９０．３３２０．０２１０．２９６次２ｈ，并对总提取时间做了调整。通过对比试验，得出提取时间延长，对含量无显著性影响。综合考虑工业成本、提取效率，最终确定用１０倍量５０％乙醇，提取３次，提取４ｈ。参考文献：［１］刘向荣，邓银华．葡萄籽多酚性成分对小鼠抗氧化作用研究［Ｊ］．中国药学杂志，２０１０，４５（１１）：８３５—８３７．［２］左媛，王晓闻．葡萄籽提取物研究进展综述［Ｊ］．山西科技，２０１０，２５（３）：１３８—１３９．方差分析结果显示，Ｂ因素有显著统计学意义，各因素对得率的影响次序为：Ｂ＞Ｃ＞Ａ。Ａ。Ｂ，Ｃ，为最佳提取方案，即１０倍量５０％乙醇，提取３次，每次２ｈ。但是考虑到提取时间过长对多酚类成分的稳定性会有影响，拟对总提取时间做调整。２．４时间对比试验以多酚类物质得率为指标，测定药材中多酚类成分的含量，验证优化工艺参数的可行性，结果见表４。表４时间对比试验（ｎ＝３）［３］杨立军．葡萄多酚的研究概况［Ｊ］．海峡药学，２００９，２１（６）：１０３—１０５．［４］高军涛，ＨｕｉｍＴａｎｇ，侯京武，等．葡萄籽中多酚类物质对氧自由基清除作用的ＥＳＲ研究［Ｊ］．波谱学杂志，１９９９，１６（５）：４０９—４１５．［５］向阳，马龙，苏德奇．比色法测定葡萄皮和葡萄籽中的含量［Ｊ］．中国公共卫生，２００３，１９（１０）：１２２８—１２２９．［６］王光亚．保健食品功效成分检测方法［Ｍ］．北京：中国轻工业出版社。２００２：１５９—１６０．济川煎颗粒质量标准的研究李文军，杨波（黑龙江中医药大学，黑龙江哈尔滨１５００４０）摘要：目的：建立济川煎颗粒质量标准。方法：运用薄层色谱法对本品中肉苁蓉和当归两味主药进行薄层定性鉴别。运用高效液相色谱法对本品枳壳中的柚皮苷进行含量测定。结果：薄层色谱斑点清晰，阴性对照无干扰。含量测定柚皮苷在０．３４¨ｇ～３．４¨ｇ范围内有良好线性关系，相关系数ｒ＝０．９９９９。回收率为９９．９６％，ＲＳＤ为１．６２％（ｎ＝６）。结论：所建立的方法可靠，能准确地进行定性、定量检测，可应用于济川煎颗粒的质量控制。关键词：济川煎颗粒；柚皮苷；薄层色谱法；高效液相色谱法中图分类号：Ｒ２８文献标识码：Ａ文章编号：１００２—２４０６（２０１２）０１—００５５—０３作者简介：李文军（１９７２一），男，高级工程师，黑龙江中医药大学２００９级在职硕士研究生，主要从事药学研究。通讯作者：杨波（１９７２一），男，博士，副研究员，主要从事生药学及科研管理工作。收稿日期：２０１ｌ一０９—０８修回日期：２０１１—１０—０４万方数据