GC-MS法检测中草药保健食品中的农药多残留
孙
莉，何
鹏，胡
杰，刘存军，吴
静
(安徽省芜湖市食品药品检验所，安徽芜湖241001)
摘要：目的
MS分析。建立一种检测保健食品中的农药多残留的分析方法。方法样品用乙腈提取并经硅胶柱净化后供GC-采用选择离子扫描方式，内标标准曲线法定量。结果20种农药在47min内达到理想的分离效果。以3个添加水平测定样品ＲSD均小于13%。各农药检测限为0．0010～0．0044mg·的回收率和相对标准偏差，回收率在72．95%和118．48%之间，
－1
kg。结论该方法简便、快速、准确、灵敏，且重现性好，可用于中草药保健食品中多种农药残留的同时测定。MS；中草药保健食品；农药；多残留关键词：GC-
Multi-residuesanalysisofpesticidesinhealth-carefoodofChinese
herbalmedicinesbygaschromatography-massspectrometry
SUNLi，HEPeng，HUJie，etal
（WuhuInstituteforFoodandDrugControl，Wuhu，Anhui241001，China）
Abstract：Objective
Todevelopananalysismethodtodetermine20pesticidesinhealth-carefoods．Methods
Samplewasextracted
withacetoneandtheextractwasfurtherpurifiedthroughasilicacolumnchromatography．ThepreparedsamplewasthenanalyzedusingGC-MSwithselectiveionmonitoringmode．Ｒesults20pesticideswerewellseparatedwithin47minutes，andallrelativestandarddevia-andtherecoverieswere72．95%～118．48%．Thelimitsofdetectionrangedfrom0．0010～0．0044mg·tionswerelessthan13%，
kg－1underthesignalnoiseratio3∶1．Conclusion
Themethodissimple，rapid，sensitive，andofgoodrepeatability．Itissuitableforthe
multi-residuesanalysisofpesticidesinChineseherbalmedicines．
Keywords：gaschromatography-massspectrometry；health-carefood；pesticide；multi-residues保健食品能调节人体的机能，适于特定人群食用，长期服
会对人体产生致畸、致癌、致突变等作用残留农药的保健品，
用，严重危害人类身体健康。目前国家已经颁布了保健食品
中部分功效成分的检验方法，而对于农药残留的检测只能参照食品中农药残留检测方法，但是食品农残检测方法中并未收载保健食品的前处理方法，所以建立一个保健食品中农药残留的检测方法已经迫在眉睫。
保健食品尤其含中草药类的成分复杂，干扰物质多，因此参照食品中一种或几种农药残留量的方法不能完全适用于中
［1-5］
。本论文的研究目标主要是建立一草药保健食品的测定个检测保健食品中农药多残留的方法。研究的主要内容是根
选择有机氯、有据国内外残留限量要求并结合农药使用现状，
［6-13］
。机磷和拟除虫菊酯等三个大类20种农药为研究对象
以中草药保健食品常见4种剂型即片剂、软胶囊、硬胶囊剂
1．3
标准品与样品20种农药标准品和内标物标准品，均
购自于德国Dr．Ehrensotrofer公司；15批中草药保健食品均购
自本市药店，其中液体制剂5批（口服液），固体制剂10批（含胶囊剂、片剂）。22．1
方法与结果
5MS毛细管色谱柱（30m×250色谱条件色谱柱：HP-μm×0．25μm）；柱温升温程：80℃（保持1min），以15℃·
－1
min－1升至180℃，再以3℃·min升至205℃（保持10
－1min），再以5℃·min升至270℃（保持3min），最后以30℃·min－1升至280℃（保持5min）；载气：高纯氦气（纯度≥－1
99．999%），载气速度：1．0mL·min；进样方式：不分流；进样口温度：260℃；进样量：1μL。
2．2
质谱条件离子源：电子电离（EI）源；电离能量：70eV；
MS接口温度：280℃；四级杆温度：离子源温度：230℃；GC-
MS同时测定中草药保健食品和溶液作为研究基质，建立GC-中20种农药多残留的高通量检测方法。11．1
实验部分仪器
Agilent7890A气相色谱仪-5975C质谱仪（安捷
伦科技公司）；IKAＲV10全自动旋转蒸发仪（德国IKA公司）；MS105电子天平（瑞士梅特勒-托利多公司）；PL303电子
150℃；溶剂延迟：3min；扫描模式：选择离子监测（SIM），1个
2～3个定性离子，选择定量离子峰面积内标法定量离子，
定量。
2．3标准储备液制备
将20种农药标准品用乙酸乙酯稀
－1
释，配制成浓度为2～12mg·L的标准混合储备液，将内标
－1
物三硫磷标准品用乙酸乙酯稀释，配制成8．31mg·L的内标储备溶液，均于冰箱中保存备用。20种农药及内标物的总离子流（TIC）色谱图见图1。由图1可以看出，所有农药均得到很好的分离。2．4
样品制备精密称取供试品2．0g（含叶绿素较多的供试品，取1．0g），置于具塞锥形瓶中（如取液体样品，锥形瓶内加入1．5gNaCl），加入乙腈15mL，置振荡器中振荡提取30min，将溶液转移至离心管中，用乙腈5mL洗涤锥形瓶，洗液并入离心管中，离心5min，将上清液转移至50mL旋蒸瓶中，于离心
天平（瑞士梅特勒-托利多公司）；IKAMS3数码涡旋振荡仪
（德国IKA公司）；ZD-4调速多用振荡器（江苏常州金坛市成
辉仪器厂）；Centrifuge5804离心机（德国Eppendorf公司）。1．2
乙腈、乙酸乙酯、丙酮、环己烷、正己烷、二氯甲
烷、石油醚（60～90℃）、甲苯、氯化钠、无水硫酸钠。除氯化
试药
钠和无水硫酸钠为分析纯外，其余均为农残级。
基金项目：安徽省食品药品监督管理系统科研项目（No2012年省局项目）
·1306·安徽医药AnhuiMedicalandPharmaceuticalJournal2013Aug;17(8)
定性分析时，先采用用两种扫描方式（SCAN和SIM）的特点，
GC-MS/SCAN确定20种农药的保留时间，如果样品色谱峰的保留时间和标准品色谱峰的保留时间一致，且样品与标准品的质谱图相似，所选择的全部监测离子均出现且丰度比也较一致，则可确定样品中存在该种农药残留；定量分析时，应用GC-MS/SIM对待测物定量分析，内标法定量，建立标准曲线。20种农药及内标物的保留时间以及GC-MS监测的特征离子
图120种农药和内标三硫磷的总离子流色谱图（TIC）
管中加入5mL乙腈重复离心一次，合并上清液，然后置旋转蒸发仪上，控制水温40℃，蒸至1～2mL，然后将该浓缩液置于硅胶固相萃取柱（1000mg/6mL，加样前柱上加无水硫酸钠约1cm高，用乙腈5mL预淋洗）上，容器用乙腈洗涤3次，每次1mL，洗液置于同一硅胶柱上，再用丙酮—正己烷（3∶7）15mL洗脱，收集全部洗脱液，置旋转蒸发仪上，蒸至近干时，加少量乙
蒸干，加入内标工作溶液125μL、乙酸乙酯酸乙酯替换两次，
875μL使溶解，MS分析。涡旋混匀，供GC-2．5检测离子的选择为提高灵敏度，降低干扰，本研究应
表1
农药名称
α-六六六六氯苯β-六六六γ-六六六五氯硝基苯二嗪农δ-六六六百菌清甲基对硫磷
七氯马拉硫磷艾氏剂对硫磷杀扑磷4，4＇-滴滴伊4，4＇-滴滴滴4，4＇-滴滴涕氯氰菊酯Ⅰ氯氰菊酯Ⅱ氯氰菊酯Ⅲ氯氰菊酯Ⅳ氰戊菊酯Ⅰ氰戊菊酯Ⅱ溴氰菊酯三硫磷（内标）和相对丰度详见表1。
2．6工作曲线的制备与检测限的测定
精密移取20种农药
50、100、250、500、1000μL，的混合标准品储备溶液10、分别各精密加入内标储备溶液250μL，置于6个2mL容量瓶中，
加乙酸乙酯稀释至刻度，摇匀，得到标准工作溶液①、②、③、④、⑤、⑥，分别精密吸取1μL，注入气相色谱—质谱联用仪，按上述方法进行测定。以各标准品溶液浓度为横坐标，各标准品峰面积与相应内标峰面积的比值为纵坐标，绘制标准曲
－1
线。各种农药在0．011～6．00mg·L范围内线性关系良好，并按3倍信噪比确定检测限（表2）。
20种农药和内标三硫磷的保留时间、定量离子、定性离子与SIM开始时间
定量离子（m/z）
181（100）284（100）181（100）181（100）237（100）137（100）181（100）266（100）263（76）272（100）173（100）263（100）109（100）145（100）246（100）235（100）235（100）181（91）181（70）181（81）181（70）167（100）167（46）181（63）157（100）表2
定性离子（m/z）111（48），219（82）142（26），214（15），249（24）
109（89），219（90）111（67），219（80）165（10），214（71），249（74）179（96），152（67），199（54）
109（65），219（94）109（17），124（15），231（10）109（100），125（88），263（76）100（96），237（36），337（20）125（95），158（45），143（23）
186（19），293（37）97（91），139（53），291（91）
125（18），302（3）176（39），318（79）165（44），199（13），212（8）165（46），199（14），212（10）127（27），163（100），207（77）127（23），163（100），207（36）127（26），163（100），207（91）127（23），163（100），207（69）207（88），225（45），281（36）207（100），225（20），281（38）207（91），253（64），281（44）121（47），199（23），342（34）SIM开始时间/min
10．7010．8611．2011．5511．7312．0612．2712．4513．5013．8214．8014．8015．4017．9020．0023．0026．7038．5038．5038．5038．5040．9040．9043．0025．60保留时间/min
10．7610．9711．4811．6511．8012．1112．3612．5113．6913．9415．1315．2215．5618．1420．2423．4026．9338．9239．1839．3339．4441．2341．8643．2625．94各标准品线性范围、回归方程与相关系数
回归方程
Y=2．1854X+0．0257Y=5．7371X－0．0355Y=1．5718X－0．0369Y=1．8596X－0．0545Y=0．6677X－0．0181Y=2．2862X－0．2001Y=1．7073X－0．0549Y=3．7338X－0．1368Y=0．661X－0．0172Y=1．1606X－0．0469Y=1．7909X－0．2351Y=1．5831X－0．0504Y=0．4183X+0．0075Y=2．1316X－0．0584Y=3．6611X－0．1209Y=5．9384X－0．3698Y=0．4894X－0．0345Y=0．4749X+0．0345Y=0．5852X－0．0673Y=0．3482X－0．0489相关系数Ｒ0．99970．99980．99880．99880．99850．99800．99870．99770．99840．99610．99530．99860．99850．99800．99820．99680．99840．99840．99900．9985检测限/mg·kg－1
0．00100．00100．00140．00120．00150．00180．00170．00150．00140．00150．00190．00150．00210．00150．00110．00220．00440．0240．0150．026农药名称α-六六六六氯苯β-六六六-γ六六六五氯硝基苯二嗪农δ-六六六百菌清甲基对硫磷
七氯马拉硫磷艾氏剂对硫磷杀扑磷4，4＇-滴滴伊4，4＇-滴滴滴4，4＇-滴滴涕氯氰菊酯氰戊菊酯溴氰菊酯线性范围/mg·L－1
0．011～1．100．013～1．260．011～1．100．014～1．410．012～1．210．030～3．010．014～1．420．011～1．150．015～1．510．012～1．190．030～3．050．013～1．290．017～1．690．012～1．220．013～1．320．017～1．730．017～1．750．041～4．070．060～6．000．052～5．23安徽医药
表3
农药名称α-六六六六氯苯β-六六六γ-六六六五氯硝基苯二嗪农δ-六六六百菌清甲基对硫磷
七氯马拉硫磷艾氏剂对硫磷杀扑磷4，4＇-滴滴伊4，4＇-滴滴滴4，4＇-滴滴涕氯氰菊酯氰戊菊酯溴氰菊酯
AnhuiMedicalandPharmaceuticalJournal2013Aug;17(8)
2．7
·1307·
20种农药回收率（n=3）
100μL
平均回ＲSD收率/%71．8277．7080．6180．4471．9676．1875．2780．6477．5885．1083．1587．5975．47103．2690．9087．2684．5393．28111．34102．56
/%4．365．795．976．324．204．129．474．595．122．482．692．8911．238．127．6310．5810．788．2312．1410．36表4
250μL平均回ＲSD收率/%80．3898．5482．6885．2674．5975．3280．2083．1684．7784．28101．51101．5779．76112．4972．8276．8576．8986．61102．4585．78
/%6．897．166．276．899．247．487．186．797．647．364．791．582．786．317．498．106．977．308．128．67
50μL平均回ＲSD收率/%72．9574．5599．6598．67112．89115．1489．61114．4695．02104．74109．07108．2795．12103．98118．4890．3389．73108．59106．16102．42
/%5．987．367．874．695．455．237．988．318．972．543．123．485．894．164．359．1411．269．409．766．13
重复性试验取同一批次样品共6份，按2．4项下方法
测定并计算各农药含量。结果，各平行制备6份供试品溶液，
农药含量的ＲSD%在2．00%～4．51%，表明方法重复性良好。
2．8回收率和精密度分别对20种农药进行高、中、低三个
每个浓度水平平行测定3份。在西瓜霜浓度的回收率试验，
含片样品中依次加入不同体积的混合标准品溶液后，按2．4
20种农项下方法处理回收样品，结果见表3。实验结果表明，ＲSD均小于13%，药的回收率均在72．95%～118．48%，表明
该方法得到较好的回收率和精密度。2．9
根据2．6项下制备好的各标准曲线，
用内标标准曲线法分别对15批保健食品中20种农药残留量
样品残留量测定
进行测定计算，结果见表4。3讨论
笔者采用的方法能同时测定中草药保健食品中的有机氯、有机磷和拟除虫菊酯三大类结构差异较大的农药。以空白样品加标回收率试验作为评价方法，通过大量的优化试验，考察了乙腈、丙酮—石油醚（1∶1）、丙酮—二氯甲烷（1∶1）、乙酸乙酯—环己烷（1∶1）的提取效果，结果表明，采用乙腈提取时20种农药回收率均在70．65%～117．90%范围内，而其他三种提取剂均有几类农药的回收率偏低，而且提取的杂质较多，对色谱柱污染较严重，故选择乙腈最为提取溶剂。
16批保健食品中的农药残留测定（mg·kg－1）
安睡－0．019－－－－－－－－－－－－0．069－－－－
西洋－－－－－－－－－－－－－－－－－－－
咽清西瓜霜芦荟西洋人参－－－－－－－－－－－－－－－－－0．1150．118－
－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－
－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－
－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－
苦瓜洋葡萄籽芦红景天－－－－－－－－－－－－－－－－0．082－－－
－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－
－－－0．034－－－－－－－－－－－－－－－0．115
农药α-六六六六氯苯β-六六六γ-六六六五氯硝基苯二嗪农Δ-六六六百菌清甲基对硫磷
七氯马拉硫磷艾试剂对硫磷杀扑磷4＇-4，滴滴伊4，4＇-滴滴滴4，4＇-滴滴涕氯氰菊酯氰戊菊酯溴氰菊酯
血尔－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－
西洋参静心－－－－－－－－－－0．067－－－－0．037－－－－
－－－－－0．115－－－－－－－－－－－－－－
山东氨基酸芦荟－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－
－－－－－0．252－－－－－－－－－－－－－－
－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－
口服液口服液阿胶浆口服液胶囊胶囊参含片含片含片参软胶囊软胶囊参软胶囊荟软胶囊软胶囊
0．2220．038
：“－”注表示未检出。
C18柱、PestiCarb/NH2串联柱和硅胶还考察了Florisil柱、
发现PestiCarb/NH2串联柱对六氯苯和五氯硝柱的净化效果，
C18柱对油脂和糖类杂质的净化效果很基苯的吸附较严重，
差，最终确定硅胶柱为净化柱，丙酮—正己烷（3∶7）为最佳洗脱液。
方法的前处理过程简单，考虑到20种农药的沸点，色谱
柱特性以及所使用载气的情况，固定载气的流速，结合实验室
直到获得理想的分离效果。采用GC条件逐步调试升温速率，
-MS选择离子监测模式，内标标准曲线法定量，较好地排除了基体、杂质干扰和操作条件的波动而对分析结果产生的干扰，
实现了保健食品中的多种农药残留的同时分析。为保健食品的质量安全和风险监测提供数据，为保健食品的科学监
·1308·安徽医药AnhuiMedicalandPharmaceuticalJournal2013Aug;17(8)
HPLC法测定四环素片的含量
杨开金
(安徽省淮南市食品药品检验所，安徽淮南232007)
摘要：目的
建立高效液相法测定四环素片含量的方法。方法
TM
C18（4．6mm×250mm，5μm）色谱柱，采用SunFire-流动相为
－1－1
醋酸铵溶液—乙腈（83∶17）；检测波长为280nm，流速为1．0mL·min，柱温为30℃。结果四环素在0．005～0．9g·L范
r=0．9998，ＲSD=0．7%（n=6）。结论该方法简便、围内线性关系良好，平均回收率为（99．8±1．0）%，准确、重现性好，适用
四环素片的质量控制。
关键词：高效液相法；四环素；含量测定
四环素属于广谱抗生素，四环素类抗生素系以四并苯（萘并萘）为母核的一族抗生素。其中有实用价值的有（不包括半合成产品）：四环素（Ⅰ）；5-羟基四环素，即四环素（Ⅱ）；
7-7-氯-四环素，即金霉素（Ⅲ）和6-去甲基-氯四环素，即去甲基金霉素（Ⅳ）。四环素临床上主要用于革兰阳性菌、阴性立克次体、滤过性病毒、螺旋体属乃至原虫类的感染，是一菌、
种广谱抗菌素，其作用机制是与核蛋白体的30S亚单位结合，
tＲNA同核糖核蛋白体结合［1］。临床上主要从而阻止氨酰基-用于革兰阳性菌、阴性菌、立克次体、滤过性病毒、螺旋体属乃
至原虫类的感染。四环素及其制剂的含量测定按照《卫生部1989年版检验，药品标准》仍采用微生物检定法。微生物
检定法实验周期长，操作繁琐，影响因素多，造成的误差比较
［3-7］
，多。笔者通过摸索，建立HPLC法测定四环素片的含量
方法准确、操作简便，重现性好，现报道如下，以供商榷。
［2］
测器；Waters色谱工作站；AE2401型电子天平（精度：0．01
mg）；TK-2200DB型数控超声波清洗仪；TOLEDO型酸度计（精度：0．01pH单位）；四环素标准品（批号：3068916971U·mg－1中国药品生物制品检定所）。四环素片3批：A药厂生B药厂生产（批号：产（批号：1003092，规格：0．25g）、
20100802，C药厂生产（批号：100313，规格：0．25g）、规格：0．125g），醋酸铵、乙二胺四醋酸二钠、三乙胺、醋酸、盐酸均
孔径0．22μm）。为分析纯。一次性微孔滤膜（进口、22．1
实验方法与结果
吸收波长的选择精密称取四环素标准品52．68mg置－1
50mL量瓶中，加0．1mol·L盐酸5mL溶解后，用水稀释
－1至刻度，摇匀，再用0．01mol·L盐酸溶液稀释至每1mL含四环素约20μg的溶液。波长扫描范围270～290nm，测定狭
1
仪器与试药
UV-2401型紫外分光光度计（日本岛津）；Waterse2695
型高效液相色谱仪；Waters2698PhotodiodeArrayDetector检
缝：1．0nm；吸收池材质：石英，光程：1cm；溶剂检查符合中国药典2010年版二部附录ⅣA规定，在280nm波长处，吸光度为0．7413。在此条件下的色谱图见图1。
标准品图紫外谱
图1
四环素紫外吸收图谱
空白溶剂紫外图谱
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（收稿日期：2013－01－08，修回日期：2013－02－13）
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